لوله کشی در اصفهان لوله بازکنی اصفهان
لوله کشی در اصفهان لوله بازکنی اصفهان
بافر نمونه گلوله های استخراج شده از مواد شوینده و به مقدار مساوی 20 _ گرم. غشاهای سیناپسی درمان نشده با مواد شوینده سپس تحت الکتروفورز ژل 8% SDS-پلی آکریل آمید قرار گرفتند. دو ژل به صورت موازی اجرا شدند و یکی با رنگ آبی کوماسی رنگ آمیزی شد تا از بارگذاری معادل اطمینان حاصل شود، و دیگری بر روی یک غشای نیتروسلولزی Hybond-ECL، Amer-sham منتقل شد. با استفاده از سیستم Transblot Hoefer. غشاها در TBS سالین بافر Tris انکوبه شدند. حاوی 3 درصد شیر بدون چربی در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 12 ساعت و لکه ها به مدت 1 ساعت با آنتی بادی اولیه 0.5-1 _grml انکوبه شدند. در TBS حاوی 0.05% Tween 20 TBST. Anti-GluR1، anti-GluR2r3، anti-NMDAR2A و anti-NMDAR2B از Upstate Biotechnology، Anti-GluR2 از Chemicon خریداری شد. آنتی سیناپتوفیزین و آنتی NMDAR1 به ترتیب از Boehringer Mannheim و Pharmingen به دست آمد. پس از شستشو با TBST، غشاها با ضد خرگوش کونژوگه پراکسیداز یا ضد IgG موش رقت 1:3000، Amersham انکوبه شدند. به مدت 1 ساعت در دمای اتاق. غشاء شسته شد و آمرشام نورتابی شیمیایی را افزایش داد. انجام شد. فیلم‌ها به‌صورت دیجیتالی در رایانه اسکن شدند و با استفاده از نرم‌افزارهای Sigmagel و Sigma plot تجزیه و تحلیل شدند. روز و به عنوان نسبت درصد نامحلول بودن بیان می شود.یرنده های NMDA در PND 1، بیان زیرواحدهای NM-DAR1 و NMDAR2B به وضوح در هر دو غشا سیناپسی تیمار نشده با مواد شوینده و تیمار شده با مواد شوینده مشاهده شد. ، به ترتیب. زیر واحد NMDAR1 و NMDAR2B سطح بیان در غشاهای سیناپسی در طول دوره پس از تولد افزایش یافت، اما هیچ تغییر رشدی قابل توجهی در نسبت درصد نامحلول هر دو زیر واحد وجود نداشت. p)0.05. شکل 1A,B .. بیان زیر واحد NMDAR2A از PND 8 مشاهده شد و نسبت نامحلول 78٪ بود. بیان NMDAR2A در غشاهای سیناپسی تا PND 22 افزایش یافت. با این حال، نسبت نامحلول زیرواحد NMDAR2A در طول دوره پس از زایمان تغییر معنی‌داری نداشت. p)0.05. شکل 1A,B .. به منظور اطمینان از اینکه سطح بالای بیان گیرنده NMDA در غشای سیناپسی استخراج شده با مواد شوینده در سنین اولیه پس از تولد یک مصنوع نیست، ما بیان رشدی سیناپتوفیزین، یک پروتئین پیش سیناپسی را بررسی کردیم. به عنوان محلول در Triton X-100 w19x، هم در غشاهای سیناپسی تصفیه نشده و هم در غشاهای سیناپسی استخراج شده با مواد شوینده شناخته شده است. سطح بالایی از بیان سیناپتوفیزین در غشاهای سیناپتیک درمان نشده با مواد شوینده در طول زندگی پس از تولد یافت شد، در حالی که هیچ بیان سیناپتوفیزینی در غشاهای سیناپسی استخراج شده با مواد شوینده در PND 1 و 8 با باندهای بسیار ضعیف در PND 15 وجود نداشت و شکل 22 1A..